Mikrobiyolojide mikroskobik araştırma yöntemleri

представляют собой способы изучения разнообразных объектов с использованием специального оборудования. Mikroskobik araştırma yöntemleri , özel ekipman kullanarak çeşitli nesneleri incelemek için yollar. İnsan gözünün çözülme gücünün sınırlarının ötesinde büyüklükte olan maddelerin ve organizmaların yapısını göz önüne almamızı sağlar. Makalede mikroskopik inceleme yöntemlerinin kısa bir analizini yapacağız.

Genel bilgi

используют в своей практике разные специалисты. Modern mikroskobik araştırma yöntemleri, farklı uzmanlar tarafından uygulamalarında kullanılır. Bunların arasında virologlar, sitologlar, hematologlar, morfologlar ve diğerleri. Mikroskopik araştırmanın ana yöntemleri uzun zamandır bilinmektedir. Her şeyden önce, bu nesneleri görüntüleme ışık modudur. Son yıllarda, diğer teknolojiler uygulamaya aktif olarak dahil edilmiştir. . Böylece popülerlik, faz kontrastlı, parlak, parazit, polarizasyon, kızıl ötesi, ultraviyole, stereoskopik inceleme yöntemini elde etti . Hepsi de çeşitli ışık özelliklerine dayanıyorlar. . Ayrıca, elektron mikroskopik inceleme yöntemleri yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu yöntemler, yönlendirilmiş bir yüklü parçacık akışı kullanarak nesneleri görüntülemenize izin verir. Bu tür inceleme yöntemlerinin yalnızca biyoloji ve tıpta kullanılmadığını belirtmek gerekir. в промышленности. Endüstride metalleri ve alaşımı incelemek için mikroskobik bir yöntem oldukça popülerdir. Böyle bir çalışma, bileşiklerin davranışını değerlendirmemize, imha olasılığını en aza indirgemek ve mukavemeti güçlendirmek için teknolojiler geliştirmemize izin veriyor.

Işık metotları: karakteristik

и других объектов базируются на различной разрешающей способности оборудования. Mikroorganizmaları ve diğer nesneleri incelemek gibi mikroskopik yöntemler , ekipmanın farklı çözünürlüğüne dayanır. Bu durumda önemli faktörler kirişin yönü, nesnenin kendisinin özelliğidir. Bunlar özellikle şeffaf veya opak olabilir. Nesnenin özelliklerine uygun olarak, ışık akısının fiziksel özellikleri - dalga yayılımının düzlemi, fazı ve yönü - genlik ve dalga boyunun neden olduğu parlaklık ve renk - değişir. . Bu özelliklerin kullanımı üzerine, farklı mikroskopik inceleme yöntemleri oluşturulmuştur.

Özgünlük

Işık üzerinde çalışmak için nesneler genellikle boyanır. Bu özelliklerin bazılarını tanımlamamızı ve tanımlamamızı sağlar. Dokuların sabitlenmesi gerekiyor, çünkü rengin bazı yapıları sadece öldürülen hücrelerde açığa çıkartacak olması. Yaşayan elementlerde, boya sitoplazmada bir vakuol olarak salınır. Yapıyı boyamıyor. Ancak hafif bir mikroskop yardımıyla canlı nesneleri keşfedebilirsiniz. Bunun için hayati bir öğrenme yöntemi kullanılır. Bu gibi durumlarda, karanlık alan yoğunlaştırıcı kullanılır. Işık mikroskopu içine yerleştirilmiştir.

Boyanmamış nesnelerin incelenmesi

Faz kontrast mikroskobu ile gerçekleştirilir. Bu yöntem, ışının nesnenin özelliklerine uygun kırınımına dayanmaktadır. Maruz kalma sürecinde, faz ve dalga boyu değişiklikleri not edilir. Mikroskop lensinde yarı saydam bir plaka bulunmaktadır. Canlı veya sabit ancak saydamlıkları nedeniyle renkli nesneler değil, neredeyse dalga fazının kaymasını tetikleyen, içinden geçen ışının rengini ve genliğini değiştirmez. Ancak nesneden geçerken, ışık akışı plakadan sapar. Neticede, cisimden geçen ışınlar ile ışıklı arka plana giren dalgalar arasında dalga boyunda bir fark görülür. Belli bir değerde, görsel bir etki oluşur - karanlık bir nesne açık bir zeminde açıkça görülebilir veya tam tersi olabilir (faz plakasının özelliklerine uygun olarak). Bunu elde etmek için, fark, dalga boyunun 1 / 4'ünden az olmamalıdır.

Antropik bir yöntem

Bir çeşit faz-kontrast metodudur. Antropik bir yöntem, arka plan ışığının yalnızca rengini ve parlaklığını değiştiren özel plakalı bir mercek kullanmayı içerir. Bu, boyanmamış canlı nesnelerin incelenmesi olanaklarını büyük ölçüde genişletir. , паразитологии при изучении растительных и животных клеток, простейших организмов. Mikrobiyolojide faz-kontrast mikroskopik bir yöntem, bitki ve hayvan hücreleri, protozoonların incelenmesinde parazitoloji kullanılır . Hematolojide, bu yöntem, kan ve kemik iliği elemanlarının farklılaşmasını hesaplamak ve belirlemek için kullanılır.

Girişim resepsiyonları

решают в целом те же задачи, что и фазово-контрастные. Bu mikroskobik araştırma yöntemleri genel olarak faz kontrastlı problemlerle aynı problemleri çözmektedir. Ancak, ikinci durumda, uzmanlar yalnızca nesnelerin konturlarını gözlemleyebilir. методы исследования позволяют изучать их части, выполнять количественную оценку элементов. Girişim mikroskopik araştırma yöntemleri , parçalarını incelemenize, öğelerin nicel değerlendirmesini yapmanıza izin verir. Işık demetinin bifurkasyonu nedeniyle bu mümkündür. Bir akım nesnenin bir parçacıklarından geçer ve diğeri de geçer. Mikroskopun göz merceğinde, birbirine yaklaşır ve müdahale eder. Ortaya çıkan faz farkı, farklı hücresel yapıların ağırlığı ile belirlenebilir. Belirlenen kırılma indeksleri ile sıralı olarak ölçülürse , sabit olmayan dokuların ve canlıların kalınlığı, protein içeriği, kuru madde ve su konsantrasyonu vb. Elde edilebilir. Elde edilen verilere göre uzmanlar membran geçirgenliğini, enzim aktivitesini ve hücre metabolizmasını dolaylı olarak değerlendirebilirler.

polarizasyon

Nicholas prizmaları veya filmy polaroidlerin yardımıyla gerçekleştirilir. Hazırlama ve ışık kaynağı arasına yerleştirilirler. позволяет изучать объекты с неоднородными свойствами. Mikrobiyolojide polarizasyon mikroskopik inceleme yöntemi, homojen olmayan özelliklere sahip nesnelerin incelenmesine olanak tanır. İzotropik yapılarda, ışığın yayılım hızı seçilen düzleme bağlı değildir. Anizotropik sistemlerde hız, cismin enine veya boyuna ekseni boyunca ışığın yönüne göre değişir. Yapı boyunca kırılma indeksi transvers boyunca olduğundan daha büyükse, çift pozitif bir kırılma yaratılır. Bu, sıkı bir moleküler yönlendirmenin tespit edildiği birçok biyolojik nesnenin karakteristiğidir. Hepsi anizotropiktirler. Bu kategori, özellikle, miyofibriller, nörofibriller, silli epiteldeki kili, kollajen lifleri ve diğerlerini içerir.

Kutuplaşma değeri

Işınım kırılmasının doğasının ve nesnenin anizotropi indeksinin karşılaştırılması yapının moleküler organizasyonunu değerlendirmeyi mümkün kılar. Polarizasyon yöntemi, histolojik analiz yöntemlerinden biri olarak işlev görür, sitolojide kullanılır vb. Işık ışığında sadece renkli nesneleri değil çalışma da mümkündür. Polarizasyon yöntemi, doku kesitlerinin boyanmamış ve sabit olmayan yerli preparatlarının araştırılmasını mümkün kılar.

Floresan teknikler

Yelpazenin mavi-mor kısmında veya UV ışınlarında parlaklık kazandırmak için bazı nesnelerin özelliklerine dayanırlar. Birçok madde, örneğin proteinler, bazı vitaminler, koenzimler, ilaçlar, birincil (kendi) lüminesans ile donatılmıştır. Diğer nesneler, florokromların (özel boyaların) ilavesiyle parlıyor. Bu katkı maddeleri, selektif hücreler ya da kimyasal bileşikler için selektif olarak ya da difüzyon yoluyla dağıtılır. Bu özellik, histokimyasal ve sitolojik araştırmalarda lüminesans mikroskobisinin kullanılmasına temel oluşturmuştur .

Kullanım Alanları

İmmün flüoresan kullanarak, uzmanlar viral antijenleri algılar ve konsantrasyonlarını belirler, virüsleri, anti cisimleri ve antijenlerini, hormonları, çeşitli metabolik ürünleri ve benzeri faktörleri tespit eder. Bu bağlamda, herpes, kabakulak, viral hepatit, influenza ve diğer enfeksiyonların teşhisinde lüminesan malzeme araştırması yöntemleri kullanılmaktadır. иммуно-флуоресцентный способ позволяет распознавать опухоли злокачественного характера, определять ишемические участки в сердце на ранних этапах инфаркта и пр. Mikroskobik immüno-floresan yöntemi, habis karakterin tümörlerini tanımaya, enfarktüsün erken evrelerinde kalpteki iskemik yamaları belirlemeye vb. Olanak tanır

Ultraviyole ışık kullanımı

Canlı hücrelere, mikroorganizmalara ya da sabit olan fakat görünür ışıkta boyanmamış, şeffaf belirli bir dalga boyundaki UV ışınlarını absorbe edebilen bir dizi maddenin kabiliyetine dayanır. Bu, özellikle, yüksek moleküllü bileşikler için tipiktir. Bunlara proteinler, aromatik asitler (metilalanin, triptofan, tirozin, vb.), Nükleik asitler, piramidal ve pürin bazlar vb. Dahildir. Ultraviyole mikroskobu, bu bileşiklerin lokalizasyonunu ve sayısını açıklığa kavuşturmayı mümkün kılar. Canlı cisimleri incelerken, uzmanlar yaşam aktivitelerinin süreçlerinde meydana gelen değişiklikleri izleyebilirler.

ilaveten

Kızılötesi mikroskopi, 750-1200 nm dalga boylu akış yapıları tarafından absorbe edilerek ışık ve UV ışınlarına opak olan nesnelerin incelenmesinde kullanılır. Bu yöntemi uygulamak için, ön-kimyasal olarak preparatları muamele etmek gerekli değildir. Kural olarak kızılötesi yöntem antropoloji, zooloji ve diğer biyolojik dallarda kullanılır. Tıbba gelince, bu yöntem başlıca oftalmoloji ve nöromorfolojide kullanılmaktadır. Hacimsel cisimlerin incelenmesi stereoskopik mikroskopi kullanılarak yapılır. Ekipmanın tasarımı, sol ve sağ gözün farklı açılarda gözlemlenmesini mümkün kılar. Opak nesneler nispeten küçük bir artışla (en fazla 120 kat) araştırılmaktadır. Mikroserrahide, patomorfolojide, adli tıpta stereoskopik yöntemler kullanılmaktadır.

Elektron mikroskopisi

Makromoleküler ve subselüler seviyelerde hücrelerin ve dokuların yapısını incelemek için kullanılır. Elektron mikroskopisi, araştırma alanında bir miktar sıçrama yapmayı mümkün kılmıştır. Bu yöntem, biyokimya, onkoloji, viroloji, morfoloji, immünoloji, genetik ve diğer dallarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Bir vakumda elektromanyetik alanlardan geçen elektron akışıyla ekipmanın çözünme gücünde önemli bir artış sağlanır. İkincisi, özel lenslerle oluşturuldu. Elektronlar nesnenin yapısından geçme veya onlardan yansıtılan farklı açılardan sapmalara sahiptir. Sonuç olarak, cihazın floresan ekranında bir ekran oluşturulur. İletim mikroskopisi ile sırasıyla bir tarama görüntüsü, bir ses görüntüsü olan düz bir görüntü elde edilir.

Ön şartlar

Elektronik mikroskopik muayeneden önce nesnenin özel eğitime tabi tutulduğuna dikkati çekmektedir. Özellikle, dokuların ve organizmaların fiziksel ya da kimyasal fiksasyonu kullanılır. Ek olarak, kesit ve biyopsi materyali dehidrate edilir, epoksi reçinelere gömülür, elmas veya cam bıçaklarla kesilerek çok ince kesitler halinde kesilir. Sonra zıt ve okudukları. Taramalı mikroskopta nesnelerin yüzeyleri incelenir. Bunu yapmak için, vakum odasında özel maddeler püskürtülür.